Методические рекомендации по изучению теоретического материала по курсу «Частная медицинская вирусология. Вирусологические методы исследования при инфекционных болезнях Вирусология какие инфекции исследуется

Вирусологические методы исследования в микробиологии

Методические рекомендации по изучению теоретического материала по курсу «Частная медицинская вирусология. Вирусологические методы исследования при инфекционных болезнях Вирусология какие инфекции исследуется

В медицине разработаны специальные методы исследования для диагностики заболеваний с вирусной природой. Это необходимо, чтобы идентифицировать вирус, изучить его биологию и способность воздействовать на клетки животного и человека. Таким образом, появляется возможность понять патогенез вирусных заболеваний и, соответственно, правильно выбрать методику лечения.

В чем заключается диагностика?

Вирусы размножаются в живых клетках. Чтобы его исследовать, необходимо культивирование на уровне подопытного организма или культуры клеток. Для этого в медицинской практике и микробиологии в целом проводятся вирусологические методы исследования, которые имеют следующие основные подходы:

  • прямой;
  • непрямой;
  • серологический.

Пенализация и депенализация – это… Понятие, определение и виды в уголовном праве

Материал могут исследовать непосредственно на наличие нуклеиновых кислот, вирусного антигена или, например, изолировать и идентифицировать вирус из клинического материала.

Кроме возможности установить этиологию заболевания, мониторинга терапевтического эффекта, вирусологические методы исследования играют большую роль в противоэпидемических мероприятиях. Для выделения и культивирования вируса используют куриные эмбрионы, лабораторных животных или культуры клеток.

Как исследуют?

Канал ДНЕВНИК ПРОГРАММИСТА Жизнь программиста и интересные обзоры всего. , чтобы не пропустить новые видео.

Самый быстрый – это прямой метод. Он позволяет обнаружить вирус, антиген или НК (нуклеиновую кислоту) в самом клиническом материале. Занимает время от двух часов до суток.

  • ЭМ – электронная микроскопия. Обнаруживает непосредственно вирус.
  • ИЭМ – иммунная электронная микроскопия. Использует специфические антитела к вирусам.
  • РИФ – реакция иммунофлюоресценции. Использует антитела, связанные с красителем. Такие вирусологические методы исследования широко применяются в качестве быстрой расшифровки этиологии ОРВИ (острых респираторных вирусных инфекций), когда берут мазки-отпечатки со слизистой оболочки верхних дыхательных путей.
  • ИФА – иммуноферментный анализ – определение вирусных антигенов, похожее на РИФ, но основанное на мечении антител ферментами.
  • РИА – радиоиммунный анализ. Использует метку антител радиоизотопами для обеспечения высокой чувствительности в определении вирусного антигена.
  • Молекулярный – гибридизация НК или выделение геномов вируса при помощи ПЦР (полимеразной цепной реакции).
  • Цитология – применяется редко, но при определенных инфекциях эти вирусологические методы исследования очень эффективны. Исследуются материалы биопсии, аутопсии и мазки, обрабатываемые с целью окрашивания и анализа под микроскопом.
  • В чем смысл исследований?

    Куда направлен вектор импульса тела? Чему сонаправлен вектор импульса тела?

    Для успешного выделения вирусов клинический материал берут в соответствии с патогенезом и как можно раньше. Часто этот процесс требует проведения нескольких пассажей, прежде чем применить определенные вирусологические методы исследования.

    Микробиология изучает микроскопические существа. И ее область – это не только медицина. Она является основополагающей наукой для сельского хозяйства, ветеринарии, космической и технической промышленности, геологии.

    Но безусловно все создано для человека и его развития на этой прекрасной планете. Поэтому очень важно вовремя обнаружить опасность и нейтрализовать ее. Вирусы отличны от бактерий.

    Это структуры, попадающие в организм и вызывающие образование нового поколения.

    Они похожи на кристаллы и направлены на управление процессом своего размножения, хотя сами не питаются, не растут и не выделяют продуктов обмена.

    Вирус способен вызвать тяжелое заболевание у любого живого организма, в который он попал. К тому же он может эволюционировать. Именно поэтому вирусологические методы исследования в микробиологии должны развиваться и совершенствоваться, так как под угрозой может быть человеческая цивилизация в целом.

    Материалы

    Для обнаружения и идентификации вирусов в медицине, как правило, берутся:

    • носоглоточный смыв (респираторные инфекции);
    • смыв и фекалии (энтеровирусные инфекции);
    • соскобы, содержимое пузырьков (поражения кожи, слизистых оболочек, как герпес, ветряная оспа);
    • смывы (экзантемные инфекции, как корь, краснуха);
    • кровь, спинномозговая жидкость (арбовирусные инфекции).

    Фазы

    Все этапы вирусологического метода исследования включают в себя:

    • забор материала;
    • выбор, получение тест-системы, определение ее жизнеспособности;
    • заражение тест-системы;
    • индикация вируса;
    • определение типа вируса.

    В основном, патогенные вирусы отличаются наличием тканевой и типовой специфичности. Взять, к примеру, полиовирус, который репродуцируется только у приматов (в их клетках). Соответственно, для выделения определенного вируса используют определенную культуру ткани. Если речь идет о неизвестном возбудителе, то целесообразно будет одномоментно заразить три, а лучше четыре культуры клеток.

    Таким образом, возможно, одна из них окажется чувствительной. Чтобы определить наличие вируса в зараженных культурах, смотрят на развитие специфической дегенерации клеток, внутриклеточные включения, выявление специфического антигена, положительные реакции гемагглютинации и гемадсорбции.

    Все вирусологические методы исследования (прямые и непрямые, серологические) должны быть выбраны, как наиболее подходящие для конкретного случая предполагаемого инфицирования.

    Непрямые методы основываются на выделении и идентификации вируса. Они трудоемкие, длительные, но точные.

    Серодиагностика

    Под такой диагностикой подразумевается метод, основанный на реакции антиген-антитело. Чаще всего используют парные сыворотки крови, взятые с интервалом в несколько недель.

    Если нарастание титра антител в 4 и больше раз, реакцию считают за положительную. Чтобы определить типоспецифичность вируса, применяют реакцию вируснейтрализации.

    Для определения группоспецифичности нужно получить реакцию связывания комплемента.

    Широко используют различные варианты иммуноферментного анализа, реакции торможения гемагглютинации, пассивной гемагглютинации, обратной пассивной гемагглютинации, РИФ.

    Еще в генной инженерии был разработан метод получения моноклональных антител. Преодолеть узкую специфичность моноклонов можно применением нескольких моноклональных антител к различным вирусным детерминантам.

    Таким образом, была повышена специфичность и чувствительность исследования с определением антигенов.

    Некоторые особенности

    Сегодня создано много разных тест-систем для иммунологической диагностики инфекций, возникших вследствие попадания вируса в живой организм.

    Таким образом, вирусологические методы исследования – это способы выделения вирусов, изучение их свойств и установление их этиологической связи с определенными заболеваниями.

    Что касается животных, используемых в этих исследованиях, то они должны быть достаточно восприимчивы к определенной вирусной инфекции, они не должны являться носителями латентной инфекции и каких-то паразитов.

    Значение также имеет вид животного, его возраст, порода, вес тела, упитанность, половая принадлежность и условия содержания. В опыте участвуют животные одного вида, возраста, с одинаковыми условиями содержания.

    Иногда могут быть использованы разные виды животных, с различной чувствительностью к одному и тому же вирусу. Это помогает выявить все разнообразие инфекционных форм.

    Источник

    Источник: https://1Ku.ru/obrazovanie/29062-virusologicheskie-metody-issledovanija-v-mikrobiologii/

    3.3 Вирусологический метод

    Методические рекомендации по изучению теоретического материала по курсу «Частная медицинская вирусология. Вирусологические методы исследования при инфекционных болезнях Вирусология какие инфекции исследуется

    Вирусологическийметодвключаетдва основных этапа: выделение вирусови их идентификацию. Материалами могутбыть кровь, другие биологические ипатологические жидкости, биоптатыорганов и тканей.

    Вирусологическоеисследование крови часто проводят сцелью диагностики арбовирусных инфекций.В слюне могут быть обнаружены вирусыбешенства, эпидемического паротита,простого герпеса. Носоглоточные смывыслужат для выделения возбудителейгриппа и других ОРВИ, кори. В смывах сконъюнктивы обнаруживают аденовирусы.Из фекалий выделяют различные энтеро-,адено-, рео- и ротавирусы.

    Длявыделения вирусов используют культурыклеток, куриные эмбрионы, иногдалабораторных животных. Большинствопатогенных вирусов отличает наличиетканевой и типовой специфичности',например, полиовирус репродуцируетсятолько в клетках приматов, поэтому длявыделения определенного вируса используютсоответствующую культуру ткани.

    Длявыделения неизвестного возбудителяцелесообразно одномоментно заражать3—4 культуры клеток, предполагая, чтоодна из них может оказаться чувствительной.Наличие вируса в зараженных культурахопределяют по развитию специфическойдегенерации клеток, т.е.

    цитопатогенномудействию, обнаружению внутриклеточныхвключений, а также на основе выявленияспецифического антигена методомиммунофлюоресценции, положительныхреакций гемадсорбции и гемагглютинации.Эмбрионы птиц с их малодифференцированнымитканями пригодны для культивированияочень многих вирусов. Чаще всегоиспользуют эмбрионы кур.

    При размножениив эмбрионах вирусы могут вызвать ихгибель (арбовирусы), появление измененийна хорион-аллантоисной оболочке (оспенныевирусы) или в теле эмбриона, накоплениев эмбриональных жидкостях гемагглютининов(вирусы гриппа, паротита) икомплементсвязывающего вирусногоантигена.

    Вирусыидентифицируют с помощью иммунологическихметодов: реакции торможения гемагглютинации,связывания комплемента, нейтрализации,преципитации в геле, иммунофлюоресценции.

    3.4 Биологический метод

    Биологическийметодсостоитв заражении различным материалом(клиническим, лабораторным) лабораторныхживотных для индикации возбудителя, атакже для определения некоторых свойствмикроорганизмов, характеризующих ихпатогенность (токсигенность, токсичность,вирулентность). В качестве лабораторныхживотных используют белых мышей, белыхкрыс, морских свинок, кроликов и др.

    Воспроизведениезаболевания у животного — абсолютноедоказательство патогенности выделенногомикроорганизма (в случае бешенства,столбняка и др.).

    Поэтому биологическаяпроба на животных является ценным идостоверным диагностическим методом,особенно при тех инфекциях, возбудителикоторых в исследуемых биологическихсредах организма человека содержатсяв малых концентрациях и плохо илимедленно растут на искусственных средах.

    3.5 Иммунологический метод

    Иммунологическийметод(серологический)включает исследования сыворотки крови,а также других биологических субстратовдля выявления специфических антител иантигенов. Классическая серодиагностикаоснована на определении антител квыявленному или предполагаемомувозбудителю.

    Положительный результатреакции свидетельствует о наличии висследуемой сыворотке крови антител кантигенам возбудителя, отрицательныйрезультат указывает на отсутствиетаковых.

    Обнаружения в исследуемойсыворотке крови антител к возбудителюряда инфекционных болезней недостаточнодля постановки диагноза, поскольку ономожет отражать наличие постинфекционногоили поствакцинального иммунитета,поэтому исследуют «парные» сывороткикрови, первую, взятую в первые дниболезни, и вторую, взятую с интервалом7—10 дней. В этом случае оценивают динамикунарастания уровня антител.

    Диагностическизначимо увеличение титра антител висследуемой сыворотке крови не менеечем в 4 раза относительно первоначальногоуровня. Этот феномен называютсероконверсией. При редких инфекционныхболезнях, а также вирусных гепатитах,ВИЧ-инфекции и некоторых других фактналичия антител свидетельствует обинфицированности пациента и имеетдиагностическое значение.

    Кромеопределения титра антител, при проведениисерологических исследований можноустановить изотип антител.

    Известно,что при первой встрече организма человекас возбудителем в остром периоде болезнивыявляют более быстрое нарастаниеантител, принадлежащих к IgM, уровенькоторых, достигая максимального значения,затем снижается.

    В более поздние срокиболезни повышается количество IgG-антител,которые дольше сохраняются и определяютсяв периоде ре-конвалесценции.

    При повторнойвстрече с возбудителем благодаряиммунологической памяти реакциигуморального иммунитета проявляютсяболее быстрой продукцией IgG-анти-тел, аантитела класса М вырабатываются внезначительном количестве. ОбнаружениеIgM-антител свидетельствует о наличиитекущего инфекционного процесса, аналичие IgG-антител — о перенесенной впрошлом инфекции или поствакцинальномиммунитете.

    Учитываяособенности первичного и вторичногоиммунного ответа, анализ соотношенияIgM- и IgG-антител позволяет в некоторыхслучаях дифференцировать стадиюинфекционного процесса (разгарзаболевания, реконвалесценция, рецидив).Например, в случае вирусного гепатитаА (ГА) надежным методом диагностикислужит определение анти-HAV IgM-антител всыворотке крови. Их выявлениесвидетельствует о текущей или недавновозникшей HAV-инфекции.

    Серологическоеисследование для обнаружения антителпри инфекционных заболеваниях являетсяболее доступным методом лабораторнойдиагностики, чем выделение возбудителя.

    Иногда положительная серологическаяреакция служит единственным доказательствомвстречи и взаимодействия организма свозбудителем соответствующегоинфекционного заболевания.

    Кроме того,ряд заболеваний со сходной клиническойкартиной (например, риккетсиозы,энтеровирусные инфекции) могут бытьдифференцированы лишь серологически,что отражает значение серологическихметодов в диагностике инфекционныхболезней.

    Источник: https://studfile.net/preview/2907808/page:3/

    Поделиться:
    Нет комментариев

      Добавить комментарий

      Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.